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Caractérisation fonctionnelle de 6 variants originaux de KISS1R dans une cohorte de 640 patients atteints d’hypogonadisme hypogonadotrope congénital isolé
SFE Lyon 2014 / Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 270–272 souhaitable de poursuivre la recherche de mutations potentielles de ce gène sur de plus grandes cohortes. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.063 CO-21
Rôle de Foxl2 dans la maturation et la fonction utérine B. Bellessort a,∗ , A. Bachelot (Dr) b , M. Le Cardinal a , M. Treier (Pr) c , G. Levi (Pr) a a MNHN, CNRS, Paris, France b Groupe hospitalier Pitié-Salpetrière, Paris, France c Université de Cologne, Cologne, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (B. Bellessort) Contexte Foxl2 est un facteur de transcription forkhead/HNF3 essentiel dans la maturation folliculaire et le maintien de la fonction ovarienne. Des mutations dans le gène codant pour FOXL2 sont responsablesdu syndrome Blépharophimosis, ptosis, épicanthus inversus, caractérisé par des malformations des paupières associé, dans certaines formes, à une insuffisance ovarienne précoce. Des données préliminaires ont montré la présence de Foxl2 dans l’utérus chez la souris. Objectif Caractérisation de la fonction de Foxl2 dans l’utérus de souris au cours du développement. Matériel et méthodes Le profil d’expression de Foxl2 a été réalisé grâce aux souris Foxl2LacZ/+ et par IHC. L’inactivation spécifique de Foxl2 dans l’utérus a été réalisé par croisement des souris invalidée pour Foxl2 avec une lignée porteuse du gène de la recombinase-cre sous le contrôle du promoteur du récepteur à la progestérone. Résultats Les souris femelles adultes Foxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ sont infertiles. Dans l’utérus, Foxl2 est observé dès la naissance dans les cellules mésenchymateuses. A maturité, l’expression de Foxl2 persiste dans la couche stromale différenciée, mais plus dans le myomètre. À 6 et 15 jours après la naissance, les souris Foxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ présentent une hypertrophie et une désorganisation de la couche myométriale interne et une diminution spectaculaire de la couche stromale. À 25 jours, et chez l’adulte, les vaisseaux sanguins de la couche stromale sont anormaux. Discussion Nos données suggèrent que Foxl2 a un rôle crucial dans la maturation postnatale du mésenchyme utérin et dans l’implantation et pourrait fournir des pistes pour mieux comprendre certaines pathologies de la réceptivité utérine chez la femme. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.064 CO-22
Devenir à long terme des patientes ayant une insuffisance ovarienne primaire : une étude longitudinale
A. Bachelot (Dr) ∗ , C. Nicolas (Dr) , S. Gricourt (Dr) , J. Dulon , J.L. Golmard (Dr) , P. Touraine (Pr) Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (A. Bachelot) Contexte L’insuffisance ovarienne primaire (IOP) est à l’origine d’une carence hormonale et d’une infertilité. Le devenir des patientes et le retentissement de la maladie à long terme ne sont pas connus. Objectif Étude longitudinale d’une cohorte de patientes avec IOP au minimum 5 ans après leur premier bilan. Patients et méthodes Evaluation des patientes avec IOP en terme de suivi médical, prise de traitement hormonal substitutif (THS), étude de la densité minérale osseuse (DMO) et réalisation d’un projet parental. Résultats Sur la cohorte de 542 patientes, 103 patientes ont été réévaluées. L’âge moyen au bilan de suivi était de 37,1 ± 0,1 ans. Le suivi était de
271
7,43 ± 3,1 ans. Soixante neuf patientes (57 %) avaient arrêté leur THS pendant plus d’un an au cours de la période de suivi, du fait de l’absence de bénéfice direct ressenti de celui-ci. Une altération de la DMO au cours du suivi était notée, avec une ostéopénie chez 59 % et une ostéoporose chez 6 % des patientes. En analyse univariée et multivariée, l’arrêt du THS était un facteur indépendant significativement associé à la diminution de la DMO (p = 0,007). Un projet parental avait abouti chez 35 des 84 couples ayant ce projet (10 grossesses spontanées, 18 après don, 8 enfants adoptés). Discussion . Cette première étude longitudinale de patientes avec IOP met en évidence la faible adhésion des patientes à leur THS, et l’importance de celui-ci dans la prévention de la déminéralisation osseuse. Un suivi spécialisé à long terme est donc primordial, afin de prévenir les conséquences de cette maladie. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
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http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.065 CO-23
Caractérisation fonctionnelle de 6 variants originaux de KISS1R dans une cohorte de 640 patients atteints d’hypogonadisme hypogonadotrope congénital isolé C. Paul a,∗ , B. Francou (Dr) a , F. Brioude (Dr) b , M.L. Raffin-Sanson c , M. Lombès d , A. Guiochon-Mantel e , J. Young f , J. Bouligand g a Inserm, U693, Faculté de médecine Paris Sud., Le Kremlin-Bicêtre, France b AP–HP, Explorations fonctionnelles, Hôpital Trousseau, Paris, France c AP–HP, Service d’endocrinologie diabétologie, GHU Paris Ile-de-France Ouest, Hôpital Ambroise-Paré, Boulogne, France d U693, Faculté de médecine Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, France e AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique et Hormonologie, Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France f AP–HP, Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France g AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique et Hormonologie Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (C. Paul) Les hypogonadismes hypogonadotropes congénitaux (HHC) entraînent une absence de puberté et une infertilité. Le gène KISS1R code KISS1R, récepteur à 7 domaines transmembranaires couplé à la protéine Gq. Son ligand est la kisspeptine (Kp10). Des pertes de fonction du récepteur et du ligand ont été identifiées dans de rares cas d’HHC normosmiques selon un mode de transmission récessif. Nous avons séquencé 640 patients HHC de la cohorte du service d’Endocrinologie du Kremlin Bicêtre et identifié 23 variants originaux (18 fauxsens, 3 non-sens, 2 épissages). De plus, une étude génétique large par séquenc¸age moyen débit des gènes impliqués dans les HHC a identifié 10 patients porteurs d’un seul variant hétérozygote de KISS1R. Nous rapportons ici la caractérisation fonctionnelle de 8 variants identifiés (5 faux-sens, 2 non-sens) de KISS1R retrouvés dans 6 familles. Ces variants de KISS1R créés par mutagénèse dirigée puis transfectés dans des cellules HEK293 T, ont été évalués après stimulation par Kp10 en étudiant deux approches complémentaires : la cinétique de phosphorylation de ERK1/2 par western blot et des courbes doses-réponses d’un gène rapporteur luciférase. Quatre variants déjà caratérisés ne montrent aucune transduction du signal. Notre travail est indispensable pour valider l’implication de différents variants de KISS1R identifiés chez des patients atteints d’HHC, établir une prévalence fiable des mutations de KISS1R et étudier finement les corrélations génotype/phénotype. D’un point de vue fondamental, les mutations étant situées sur différents domaines du récepteur, cette étude permettra aussi de préciser les relations structure/fonction. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.066
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http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.063 CO-21
Rôle de Foxl2 dans la maturation et la fonction utérine B. Bellessort a,∗ , A. Bachelot (Dr) b , M. Le Cardinal a , M. Treier (Pr) c , G. Levi (Pr) a a MNHN, CNRS, Paris, France b Groupe hospitalier Pitié-Salpetrière, Paris, France c Université de Cologne, Cologne, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (B. Bellessort) Contexte Foxl2 est un facteur de transcription forkhead/HNF3 essentiel dans la maturation folliculaire et le maintien de la fonction ovarienne. Des mutations dans le gène codant pour FOXL2 sont responsablesdu syndrome Blépharophimosis, ptosis, épicanthus inversus, caractérisé par des malformations des paupières associé, dans certaines formes, à une insuffisance ovarienne précoce. Des données préliminaires ont montré la présence de Foxl2 dans l’utérus chez la souris. Objectif Caractérisation de la fonction de Foxl2 dans l’utérus de souris au cours du développement. Matériel et méthodes Le profil d’expression de Foxl2 a été réalisé grâce aux souris Foxl2LacZ/+ et par IHC. L’inactivation spécifique de Foxl2 dans l’utérus a été réalisé par croisement des souris invalidée pour Foxl2 avec une lignée porteuse du gène de la recombinase-cre sous le contrôle du promoteur du récepteur à la progestérone. Résultats Les souris femelles adultes Foxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ sont infertiles. Dans l’utérus, Foxl2 est observé dès la naissance dans les cellules mésenchymateuses. A maturité, l’expression de Foxl2 persiste dans la couche stromale différenciée, mais plus dans le myomètre. À 6 et 15 jours après la naissance, les souris Foxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ présentent une hypertrophie et une désorganisation de la couche myométriale interne et une diminution spectaculaire de la couche stromale. À 25 jours, et chez l’adulte, les vaisseaux sanguins de la couche stromale sont anormaux. Discussion Nos données suggèrent que Foxl2 a un rôle crucial dans la maturation postnatale du mésenchyme utérin et dans l’implantation et pourrait fournir des pistes pour mieux comprendre certaines pathologies de la réceptivité utérine chez la femme. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.064 CO-22
Devenir à long terme des patientes ayant une insuffisance ovarienne primaire : une étude longitudinale
A. Bachelot (Dr) ∗ , C. Nicolas (Dr) , S. Gricourt (Dr) , J. Dulon , J.L. Golmard (Dr) , P. Touraine (Pr) Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (A. Bachelot) Contexte L’insuffisance ovarienne primaire (IOP) est à l’origine d’une carence hormonale et d’une infertilité. Le devenir des patientes et le retentissement de la maladie à long terme ne sont pas connus. Objectif Étude longitudinale d’une cohorte de patientes avec IOP au minimum 5 ans après leur premier bilan. Patients et méthodes Evaluation des patientes avec IOP en terme de suivi médical, prise de traitement hormonal substitutif (THS), étude de la densité minérale osseuse (DMO) et réalisation d’un projet parental. Résultats Sur la cohorte de 542 patientes, 103 patientes ont été réévaluées. L’âge moyen au bilan de suivi était de 37,1 ± 0,1 ans. Le suivi était de
271
7,43 ± 3,1 ans. Soixante neuf patientes (57 %) avaient arrêté leur THS pendant plus d’un an au cours de la période de suivi, du fait de l’absence de bénéfice direct ressenti de celui-ci. Une altération de la DMO au cours du suivi était notée, avec une ostéopénie chez 59 % et une ostéoporose chez 6 % des patientes. En analyse univariée et multivariée, l’arrêt du THS était un facteur indépendant significativement associé à la diminution de la DMO (p = 0,007). Un projet parental avait abouti chez 35 des 84 couples ayant ce projet (10 grossesses spontanées, 18 après don, 8 enfants adoptés). Discussion . Cette première étude longitudinale de patientes avec IOP met en évidence la faible adhésion des patientes à leur THS, et l’importance de celui-ci dans la prévention de la déminéralisation osseuse. Un suivi spécialisé à long terme est donc primordial, afin de prévenir les conséquences de cette maladie. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.065 CO-23
Caractérisation fonctionnelle de 6 variants originaux de KISS1R dans une cohorte de 640 patients atteints d’hypogonadisme hypogonadotrope congénital isolé C. Paul a,∗ , B. Francou (Dr) a , F. Brioude (Dr) b , M.L. Raffin-Sanson c , M. Lombès d , A. Guiochon-Mantel e , J. Young f , J. Bouligand g a Inserm, U693, Faculté de médecine Paris Sud., Le Kremlin-Bicêtre, France b AP–HP, Explorations fonctionnelles, Hôpital Trousseau, Paris, France c AP–HP, Service d’endocrinologie diabétologie, GHU Paris Ile-de-France Ouest, Hôpital Ambroise-Paré, Boulogne, France d U693, Faculté de médecine Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, France e AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique et Hormonologie, Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France f AP–HP, Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France g AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique et Hormonologie Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (C. Paul) Les hypogonadismes hypogonadotropes congénitaux (HHC) entraînent une absence de puberté et une infertilité. Le gène KISS1R code KISS1R, récepteur à 7 domaines transmembranaires couplé à la protéine Gq. Son ligand est la kisspeptine (Kp10). Des pertes de fonction du récepteur et du ligand ont été identifiées dans de rares cas d’HHC normosmiques selon un mode de transmission récessif. Nous avons séquencé 640 patients HHC de la cohorte du service d’Endocrinologie du Kremlin Bicêtre et identifié 23 variants originaux (18 fauxsens, 3 non-sens, 2 épissages). De plus, une étude génétique large par séquenc¸age moyen débit des gènes impliqués dans les HHC a identifié 10 patients porteurs d’un seul variant hétérozygote de KISS1R. Nous rapportons ici la caractérisation fonctionnelle de 8 variants identifiés (5 faux-sens, 2 non-sens) de KISS1R retrouvés dans 6 familles. Ces variants de KISS1R créés par mutagénèse dirigée puis transfectés dans des cellules HEK293 T, ont été évalués après stimulation par Kp10 en étudiant deux approches complémentaires : la cinétique de phosphorylation de ERK1/2 par western blot et des courbes doses-réponses d’un gène rapporteur luciférase. Quatre variants déjà caratérisés ne montrent aucune transduction du signal. Notre travail est indispensable pour valider l’implication de différents variants de KISS1R identifiés chez des patients atteints d’HHC, établir une prévalence fiable des mutations de KISS1R et étudier finement les corrélations génotype/phénotype. D’un point de vue fondamental, les mutations étant situées sur différents domaines du récepteur, cette étude permettra aussi de préciser les relations structure/fonction. Déclaration d’intérêts flits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.066