Conservation des plaquettes par congélation

Revue Fran~aise de Transfusion et immuno-h6matologie Tome XXV - - N ° 1. - - 1982

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ENSEIG'NEMENT POST- UNI VERS1TAIRE

Conservation des plaquettes par cong6lation par G. P O T R O N *

et P. H E R V E * *

* Laboratoire central d'Hdmatologie, C.H.U., REIMS. ** Centre r6gional de T r a n s f u s i o n Sanguine,

BESANCON.

LES RISQUES DE LESIONS CELLULAIRES D U E S A LA C O N G E L A T I O N L

'EAU c o m m e n c e h se t r a n s f o r m e r e n glace ~t 0°C avec f o r m a t i o n de c r i s t a u x . La t a i l l e et le h o m b r e de c r i s t a u x a u g m e n t e n t avec la v i t e s s e de cong61ation.

Au n i v e a u d ' u n e s u s p e n s i o n c e l l u l a i r e , les p h 6 n o m 6 n e s s o n t complexes, i m p a r f a i t e m e n t c o n n u s [20, 42, 43, 45] m a i s d 6 p e n d e n t a u s s i de la v i t e s s e de r e f r o i d i s s e m e n t : - - h v i t e s s e l e n t e de c o n g d l a t i o n , les c r i s t a u x de glace se f o r m e n t d ' a b o r d d a n s le m i l i e u e x t r a c e l l u l a i r e ( p r o b a b i l i t 6 p l u s g r a n d e de c e n t r e de c r i s t a l l i s a t i o n , p l u s g r a n d degr6 de l i b e r t 6 de l ' e a u f a c i l i t a n t l'arrangement t 6 t r a 6 d r i q u e ) . C e t t e c r i s t a l l i s a t i o n d ' e a u p u r e e n t r a l n e

Manuscrit re~u le 1-7-1981.

76

POTRON

G. et H E R V E

P_

une forte a u g m e n t a t i o n de l'osmolarit6 du liquide extracellulaire. Ii s'ensuit une sortie d'eau des cellules o c c a s i o n n a n t une d6shydratation. Les 16sions dues au choc o s m o t i q u e sont renforcdes 6ventuellement p a r l'apparition des cristaux intracellulaires de grande taille. --~ vitesse rapide de cong61ation, la cristallisation se p r o d u i t simultandment en intra et extra-cellulaire. Les cristaux sont petits et n o m b r e u x et les 16sions mdcaniques a u t a n t q u ' o s m o t i q u e s tr6s r6duites.

L'~tat de congdlation n'est pas stable et varie avec la t e m p 6 r a t u r e : si le p r o d u i t est conserv6 h des t e m p d r a t u r e s sup6rieures h - - 6 0 ° C , les petits cristaux se r a s s e m b l e n t (ph6nom6ne de recristallisation) e n t r a l n a n t un risque de 16sions mdcaniques. La vitesse de ddcongdlation joue 6galement un r61e f o n d a m e n t a l : trop lente, elle p e r m e t la recristallisation qui, form6e dans les cellules, p r o v o q u e des r u p t u r e s de m e m b r a n e s et des d6sordres irr6versibles dans le cytoplasme. Techniquement, il i m p o r t e donc d'6viter certains 6cueils. Si la cong61ation doit ~tre rapide, elle doit 6viter le pic de surfusion avant cong61ation. I1 est en effet source de d6s6quilibre de cristallisation extra et intracellulaire [15]. La cong61ation 6rant un phdnombne e x o t h e r m i q u e , il appara~t u n plateau darts l'abaissement de la temp6rature, source de ldsion cellulaire. Le stockage des produits congelds doit 6viter route remont6e en t e m p 6 r a t u r e p o u r pallier le ph6nom6ne de recristallisation. Ceci interdit tout t r a n s p o r t , mSrne court, h t e m p 6 r a t u r e ambiante. La d6cong61ation dolt 6tre aussi rapide que la congdlation car les risques de 16sions m6caniques et osmotiques vont a p p a r a i t r e de la m6rne mani6re mais en o r d r e invers6. Les c r y o p r o t e c t e u r s ont p o u r b u t de r6duire les 16sions o s m o t i q u e s et m6caniques de la cong61ation. Malheureusement, ces c r y o p r o t e c t e u r s peuvent avoir une action ,, toxique ,, sur les cellules. Ceux qui pdn6trent ais6ment dans la cellule (DMSO) font a p p a r a i t r e u n risque o s m o t i q u e tandis que ceux qui p6nbtrent trop lentement peuvent d o n n e r une p r o t e c t i o n i m p a r f a i t e (glycdrol). Certains peuvent alt6rer les s t r u c t u r e s cellulaires c o m m e les m e m b r a n e s (DMSO) et doivent 6tre employ6s ~ faible concentration, g t e m p 6 r a t u r e basse et mis en c o n t a c t pen de temps avant et apr6s cong61ation-d6cong61ation [78]. Si le choix du c r y o p r o t e c t e u r ddpend du type de cellules h congeler, la c o n c e n t r a t i o n ddpend de la vitesse de cong61ation; elle doit 6tre 61ev6e p o u r des vitesses lentes, ce qui peut poser des probl6mes de toxicitd cellulaire du c r y o p r o t e c t e u r .

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

77

LA CONGELATION PLAQUETTAIRE Rappel de la physiologie plaquettaire. La s t r u c t u r e interne de la p l a q u e t t e est complexe et c o r r e s p o n d ~t une h a r m o n i e indispensable aux actions plaquettaires. Le cytosquelette f o r m d de m i c r o t u b u l e s en a n n e a u est li6 au syst6me musculaire et sa c o n t r a c t i o n j o u e u n r61e f o n d a m e n t a l dans la libdration du c o n t e n u plaquettaire. Ce c o n t e n u est localisd s u r t o u t dans les granules qui sont de deux types au m o i n s : les granules ~ contienn e n t les hydrolases acides, les granules denses c o n t i e n n e n t I'ATP, la s6rotonine, les cat6cholarnines, le calcium. L ' a r s e n a l e n z y m a t i q u e de la p l a q u e t t e est complexe : le syst6me nucl6otidique r6gule la p r o d u c t i o n d'ADP. La f o r m a t i o n d'AMPc j o u e un r61e central dans le t r a n s f e r t du calcium et la c o n t r a c t i o n plaquettaire. Le t r a n s f e r t de calcium est 6galement assur6 p a r la synth6se des p r o s t a g l a n d i n e s d o n t le p r o d u i t le plus actif p o u r la c o n t r a c t i o n est le t h r o m b o x a n e A 2 ddgrad6 en p a t t i e en malondiald6hyde. La p l a q u e t t e est c a p a b l e d ' a d h 6 r e r au collag6ne et aux microfibrilles. Cette adh6sion agit sur la m e m b r a n e p o u r y activer notamm e n t les phospholipases, p r e m i 6 r e 6tape de la synth6se des prostaglandines. La c o n t r a c t i o n qui suit p e r m e t la lib6ration du contenu g r a n u l a i r e d o n t I'ADP qui est capable, en pr6sence de fibrinog6ne, d'activer une seconde voie de la plaquette. L'ADP est ainsi capable d'agir sur d ' a u t r e s p l a q u e t t e s en les activant ce qui a b o u t i t au p h 6 n o m 6 n e d'agrdgation h l'origine du t h r o m b u s b l a n c de l ' h 6 m o s t a s e initiale. Ces actions complexes s u p p o s e n t que s t r u c t u r e s internes et syst6me e n z y m a t i q u e soient intacts apr6s conservation. Ceci s u p p o s e aussi que les r 6 c e p t e u r s m e m b r a n a i r e s (ADP, fibrinog6ne, f a c t e u r Willebrand, etc.) ne soient pas alt6rds. La p l a q u e t t e est toutefois un 61dment tr6s fragile" elle s u p p o r t e real ] ' e x p o s i t i o n au froid avec d6polymdrisation des m i c r o t u b u l e s [81] et agr6gation spontan6e [31]. Elle s u p p o r t e m i e u x l ' h y p e r o s m o l a r i t 6 que l ' h y p o o s m o l a r i t 6 [19, 55].

Les m~thodes d'6tude in vitro. Aprhs cong61ation, les p l a q u e t t e s doivent avoir conserv4 leurs fonctions h d m o s t a t i q u e s m a i s 4tre capables de survivre normalem e n t huit jours. I1 i m p o r t e donc de sdlectionner des tests capables d ' e x p l o r e r ces deux aspects. Cependant, il est 4vident que la complexit6 des fonctions p l a q u e t t a i r e s conduit /~ l'utilisation d ' u n vdritable panel de tests. II i m p o r t e donc de choisir des tests capables d'etre rdalisds en routine et p o u v a n t p e r m e t t r e de prdvoir une b o n n e activit6 i n v i v o aprhs transfusion.

78

P O T R O N G. et H E R V E P.

A. - - MORPHOLOGIE. L'observation en contraste de phase de N o m a r s k y p e r m e t seule une b o n n e analyse. On observe ainsi des aspects avec dendrites, margination des granules, ballonisation, etc. Certains ont propos6 une quantification de ces images (TabI. I) [38, 17, 82, 53, 10].

TABLEAU I C l a s s e m e n t des alterations m o r p h o l o g i q u e s des p l a q u e t t e s au cours de la conservation.

D1~NOMINATION

ASPECT MORPHOLOGIQUE

FONCTION

Lenticulaire

Membrane r6guli~re, granulom~re diffus

Normale

Sphere Ballonis6e Dendrites ou p s e u d o p o d e s ~, Capping ~, Vide

Perte de la f o r m e lenticulaire Sph6rique,

diambtre augment6

D6but d'activation En

g6ndral ballonis6e, granulations excentrdes dispos6es en p6riphdrie

E n g~ndral ballonis6e, f a n t 6 m e cellulaire d6pourvu de granulations

Subnormale Altdr6e Variable Tr~s altdrde Nulle

Cette technique ndcessite u n appareillage qui tend /~ se rdpandre. La p h o t o g r a p h i e en noir et blanc peut aider h la quantification des aspects et il parait certain que les plaquettes ballonisdes et d6pourvues de granules ont des fonctions tr6s appauvries [5]. Si, dans la m~me manipulation, on laisse la plaquette s6dimenter entre lame et lamelle, elle adh6re et s'6tale sur le verre, ce qui p e r m e t une analyse simple de cette fonction complexe [7]. L'6tude en microscopie 61ectronique est trop complexe et coflteuse p o u r 6tre utilisde en routine. Elle p e r m e t c e p e n d a n t de mieux d6finir les aspects vus en c o n t r a s t e de phase [5, 39, 62] ainsi q u ' u n e analyse fine des s t r u c t u r e s internes : glycog6ne [68], microfibrilles [79] syst6me tubulaire dense, m i c r o t u b u l e s (Fig. 1 et 2). I1 est 6vident q u ' u n test morphologique, fut-il simple, est indispensable au contr61e des plaquettes conserv6es et q u ' u n e d6gradation trop i m p o r t a n t e est source d'dchec th6rapeutique.

FIG. 1. - - M o r p h o l o g i e p l a q u e t t a i r e e n m i c r o s c o p i e 6 1 e c t r o n i q u e S 6 p a r a t i o n s u r H a e m o n e t i c s 30 - g l y c 6 r o l 3 %.

FIG. 2. - - M o r p h o l o g i e p l a q u e t t a i r e en m i c r o s c o p i e 6 1 e c t r o n i q u e S 6 p a r a t i o n s u r H a e m o n e t i c s 30 - g l y c 6 r o l 3 % a p r b s c o n g 6 1 a t i o n et d 6 c o n g 6 1 a t i o n ~t - - 1 9 6 ° C .

POTRON

80 B.

--

MESURE

G. et H E R V E

P.

DU V O L U M E P L A Q U E T T A I R E .

Cette m e s u r e est t h d o r i q u e m e n t capable de q u a n t i f i e r le phdnom 6 n e de ballonisation. Elle est c e p e n d a n t sensible h l'activation et, surtout, l'utilisation de c r y o p r o t e c t e u r intracellulaire p e u t a u g m e n t e r le v o l u m e p l a q u e t t a i r e p a r r e n t r 6 e d'eau. Enfin, ces m e s u r e s rdalisables en sdrie, exigent des appareillages sophistiqu6s. C. --

CONTENU

GRANULAIRE.

Aisdment visible en m i c r o s c o p i e 61ectronique, cette m d t h o d e perm e t difficilement des 6tudes quantitatives des granules sur des coupes. Elle est i n a p p l i c a b l e ~t la sdrie. Les granules denses p e u v e n t 6tre f a c i l e m e n t c o m p t d s en fluorescence apr~s i n c o r p o r a t i o n de la m d p a c r i n e [40]. L ' a c t i v a t i o n p l a q u e t t a i r e e n t r a i n e une libdration de ces granules et donc la p e r t e de la fluorescence /~ la mdpacrine. Ce test, r e l a t i v e m e n t simple, ndcessite u n m i c r o s c o p e en fluorescence et est f a c i l e m e n t quantifiable. I1 est applicable ~ de courtes sdries d'essais. D.

--

ADHI~SION

PLAQUETTAIRE.

Les t e c h n i q u e s d'~tude en sont varides et r e c o u r e n t essentiellem e n t en routine aux billes de v e r r e [25]. L'adhdsion est plus n e t t e en pr6sence d'h6maties, m a l h e u r e u s e m e n t b e a u c o u p de p l a q u e t t e s tr6s altdr6es p a r la c o n s e r v a t i o n d o n n e n t des adhdsions tr~s 61evdes rend a n t ce test p e u utilisable p o u r de telles 6tudes. E.

--

AGRt~GATION P L A Q U E T T A I R E .

Cette m 6 t h o d e classique ndcessite u n a p p a r e i l l a g e adaptd m a i s c o u r a n t et s u r t o u t une technologie rigoureuse. Les r6actifs agrdgants sont multiples : ADP, adr6naline, collag~ne, acide arachidonique, PAF ac6ther [6]. Le p h d n o m 6 n e test6 est complexe. La sensibilit6 des r d c e p t e u r s m e m b r a n a i r e s , les chaines e n z y m a t i q u e s cytoplasmiques, le c o n t e n u p l a q u e t t a i r e et la capacit6 de libdration des granules, le syst~me dnergdtique et contractile sont p a r m i les 6Mments actifs. Ce test, utilisable en routine, pose de difficiles p r o b l 6 m e s d'interp r d t a t i o n quantitative. L'agrdgation est inhib6e g p H acide c o m m e p a r exemple en ACD acidifi6 g6n6ralement utilis6 p o u r la p r d p a r a t i o n des concentr6s plaquettaires. Surtout, ce test est tr6s sensible aux variations p h y s i q u e s du milieu de lecture, v a r i a t i o n s p o u v a n t 6tre p r o d u i t e s p a r le glycdrol ou p a r la m o d i f i c a t i o n de la r6fringence p l a q u e t t a i r e [67]. Enfin, des traces d'ADP lib6r6 dans le milieu entrai-

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

81

nent un 6tat rdfractaire de la plaquette, 6tat p r o b a b l e m e n t r6versible in vivo. L'utilisation de concentrations 61ev6es en ADP ou l'incubation en pr6sence d'apyrase peuvent lever cot obstacle [12]. Si on travaille sur plaquettes lav6es, l'agr6gation par I'ADP ne peut 6tre obtenue q u ' e n pr6sence de fibrinogbne. Certaines plaquettes peuvent ne pas r d p o n d r e h un seul stimulant mais seulement ~t l'association c o m m e par exemple adr6naline et A D P ; ce ph6nom~ne reste difficile analyser. Cependant, il n'est pas certain q u ' u n e alt6ration de la fonction d'agr6gation soit d6finitive. Dans certaines conditions, on observe une am61ioration in vitro ~ 37°C en incubation dans du p l a s m a ; on peut p e n s e r que cette fonction est capable de r6cup6rer in vivo. F. - - LES FONCTIONS MI~TABOLIQUES. Elles b6n6ficient des progr~s de la physiologie plaquettaire.

constants

dans

la connaissance

1. Mdtabolisme de la sdrotonine. L ' i n c o r p o r a t i o n de la s6rotonine dans les granules denses est un ph6nom~ne actif. En utilisant la s6rotonine 14 C, il est possible d'appr6cier l ' i n c o r p o r a t i o n initiale [24], l ' i n c o r p o r a t i o n m o y e n n e h 30 minutes [14] et totale en 2 heures [41]. R6serv6e aux laboratoires sp6cialis6s, cette 6preuve semble constituer p o u r certains un b o n test de viabilit6 [24, 51]. 2. Les syst~mes enzymatiques. Le c o n t e n u e n z y m a t i q u e plaquettaire est complexe. Les enzymes de la glycolyse, la B glycoronidase [37] semblent assez stables pendant la conservation. I1 est cependant utile de m e s u r e r dans le surnageant l'activit6 enzymatique lib6r6e par la lyse cellulaire (B glycuronidase, LDH, etc.) d o n n a n t un b o n parall61isme avec les 16sions morphologiques. N o t o n s que le DMAC inhibe la B glycuronidase [76]. L'6preuve de ~ f l u o r o c h r o m a s i e vitale ,, teste les capacit6s des est6rases cytoplasmiques de d6couper le diac6tate de fluoresc6ine [56]. De r6alisation facile, ce test semble p o u r KUCHNER un bon test de viabilit6. 3. Mdtabolisme des prostaglandines. Ce syst6me joue u n r61e f o n d a m e n t a l dans l'agr6gation plaquettaire et le p h 6 n o m 6 n e de lib6ration. Le test le plus simple est celui du dosage du malondiald6hyde [52]. Mais si une a c c u m u l a t i o n de ce m6tabolite c o r r e s p o n d ~ une activation, une diminution de sa pro-

82

POTRON G. et HERVE P.

duction in vitro peut r6versible.

t6moigner

d ' u n e inhibition

6ventuellement

Go - - LA RJ~SISTANCEOSMOTIOUE. Ce test fait appel ~t la propri6t6 q u ' o n t les plaquettes raises en milieu h y p o t o n i q u e d ' a b s o r b e r l'eau puis de la lib6rer activement. Ce ph6nom~ne complexe semble assez bien lid ~ l'int6grit6 plaquettaire et n o t a m m e n t ~t son syst6me 6nerg6tique [32, 49, 50, 35]. I1 est de r6alisation aisde si l'on dispose d ' u n p h o t o m ~ t r e avec enregistreur. I1 est m a l h e u r e u s e m e n t tr~s influenc6 par la pr6sence intracytoplasm i q u e de c r y o p r o t e c t e u r h p6n6tration et sortie lente tel le glyc6rol. Choix d ' u n e m d t h o d o l o g i e d'dtude.

Si l'on d6sire analyser une mdthodologie de cong61ation, il est utile de p o u v o i r disposer d ' u n vdritable panel de tests c e r n a n t a u t a n t que possible les principales fonctions plaquettaires. Si l'on ne doit que contr61er des p r 6 p a r a t i o n s /~ usage quotidien, il faut choisir u n test simple et sensible. Les autres tests doivent 6tre choisis en fonction de la technique utilis6e car certains tests sont inutilisables p a r exemple en milieu acide /~ cause du cryoprotecteur (Tabl. II) mais aussi des m o y e n s techniques dont on peut disposer. Le test m i n i m u m est u n contr61e de m o r p h o l o g i e ; il peut 6tre quantifi6 p o u r une dtude et simplifi6 en routine. De faqon plus approfondie, il convient de v6rifier les capacitds d'adh6sion sur lame et d'agr6gation. L'agr6gation et doric le p h 6 n o m b n e de ~, release ,, 6tant g6n6ralement n o n interprdtable sur des concentr6s acidifi6s, il iraporte de v6rifier p a r le test ~ la m d p a c r i n e que le c o n t e n u plaquettaire (ici les granules denses) est prdsent. La m e s u r e de la libdration d'enzymes dans le s u r n a g e a n t a le m6rite d'utiliser des techniques courantes de biochimie mais d o n n e u n indice trbs indirect de la capacit6 des plaquettes restantes. II est souhaitable, dans le m 6 m e sens, de v6rifier que l a synth~se des prostaglandines persiste p a r le test au malondiald6hyde. Les tests in vivo.

Logiquement, il faut obtenir un r e n d e m e n t aussi 61ev6 que possible de p l a q u e t t e s ayant une dur6e de vie suffisante et une activit6 h 6 m o s t a t i q u e importante. Le caIcul d u r e n d e m e n t c o m p a r e le chiffre de plaquettes avant e t / o u apr~s cong61ation au chiffre retrouv6 in vivo dans les premieres

83

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

TABLEAU II Influence du mode de prdparation sur les tests fonctionnels plaquettaires. PLAQUETTES FRA~CHES

ACD PONCTION

HAEMONETICS NON ACIDIFI~ES

CONCENTRATION ACIDIFI~ES

CONCENTRATION ACIDIFIgES

300

1 600___ 600

990

1 100

80 15 5

6 0 + 10 25-+ 10 15 -+ 5 ++

75 15 10 +

75 25 0

0 0

0

VEINEUSE NON ACIOIFIEES

Num. x l O a / m m s

CPD

Morphologie (%) - - disques - - spheres - - ballons - - dendrites - - capping - - vides Agr6gats

0 0

0 0

0 ++

++

Adhdsion en 15 m n

95%

95 %

90 %

98 %

Mdpacrine

4,85

5,10

4,80

4,35

Ndgative

N6gative

Agrdgation

MDA test Rdsistance osmotique

ADP = + + + + ADR = + + + + DV 5,6 C/A =

2,2

8,4 65 %

R/A = 100 % FDA test

ADP = + + + ADR = + + + DV

100 %

C/A = 64%±9% R/A = 96%___4% 90 '% ___ 5 %

C/A = 49 % C/A = 42 °A R/A = 85 % R/A = 70 °A 89 %

93 %

MDA : malondiald6hyde - - FDA : test fluorochromasie. heures. Le calcul peut se faire apr6s numdration plaquettaire [71, 14] mais ce comptage est entach6 d'erreurs dues h des agr6gats formds l o r s d e l a p r 6 p a r a t i o n [ 7 2 ] . I1 p e u t r e c o u r i r a u x m 6 t h o d e s i s o t o p i q u e s . Le marquage peut 6tre fait avant cong6lation pour des essais de conservation d e c o u r t e d u r d e o u p l u t 6 t a p r 6 s c o n g 6 1 a t i o n [74, 4 6 ] . Dans ce dernier cas, le marquage p e u t s e f a i r e a u C r ~1 m a i s il e s t influenc6 par les conditions techniques. Le marquage h l'indium [77] est plus efficace et doit 6tre pr6fdr& De nombreuses f o r m u l e s d e c a l c u l o n t 6 t 6 p r o p o s 6 e s [23, 47, 2, 9, 7 2 ] . E l l e s d e v r a i e n t t o u j o u r s t e n i r c o m p t e d u v o l u m e s a n g u i n d u

84

P O T R O N G. et H E R V E P.

receveur. Le p r o b l ~ m e le plus c o m p l e x e est celui de l ' h o r a i r e de recueil des pr616vements sanguins aprbs transfusion. G6n6ralement, ils sont effectu6s darts les 2 h e u r e s qui suivent, parfois moins. E n fait, on p e u t assister ~ une r e m o n t 6 e o b s e r v a b l e h la 18e heures [47], voire fl la 24 e h e u r e [72] li6e ~ une s 6 q u e s t r a t i o n spl6nique t e m p o r a i r e puis ~t une lib6ration secondaire. Le r e n d e m e n t est g6n6ralement meilleur chez les sujets spl6nectomis6s ; il est m a u v a i s chez les sujets h y p e r t h e r m i q u e s ou atteints de septic6mie [21]. Le calcul de la durde de vie n6cessite des t e c h n i q u e s de m a r q u a g e isotopique. Elles sont ais6ment i n t e r p r 6 t a b l e s chez les sujets t6moins et s u r t o u t en a u t o - t r a n s f u s i o n [72]. Elles sont s o u v e n t tr6s entach6es d ' e r r e u r s chez les sujets p a t h o l o g i q u e s g6n6ralement immunis6s, les a n t i c o r p s p o u v a n t p a r ailleurs faciliter l'61ution du m a r q u e u r sans lyse cellulaire [22]. I1 n ' y a pas de parall61isme e n t r e la fonction et la dur6e de vie plaquettaire. Enfin, la dur6e de vie p e u t 6tre r6duite p a r h 6 m o r r a g i e ou lors de d y s f o n c t i o n n e m e n t de la coagulation (CIVD).

L'efficacit~ clinique r e s t e t o u j o u r s entach6e d ' e r r e u r car il n ' y a pas de parall61isme absolu e n t r e le degr6 de la t h r o m b o p 6 n i e et le risque h 6 m o r r a g i q u e . Les crit6res choisis sont multiples : l ' i m p o r t a n c e du p u r p u r a et des h 6 m o r r a g i e s r e s t e subjective m a i s p e u t constituer, sur une p o p u l a t i o n de malades, un m o d e d ' o b s e r v a t i o n a d a p t 6 h la finalit6 de cette transfusion. La m e s u r e du t e m p s de s a i g n e m e n t est u n excellent m o d e de surveillance si l'on choisit u n e b o n n e t e c h n i q u e [44], Elle p e u t d'ailleurs 6tre effectu6e chez des sujets t6moins r e c e v a n t de l'aspirine qui allonge le t e m p s de s a i g n e m e n t ; u n e a u t o t r a n s f u s i o n corrige cet a l l o n g e m e n t [32, 71]. Le test de c a p i l l a r o d y n a m o m 6 t r i e est m i e u x support6 p a r les m a l a d e s m a i s explore aussi les propri6t6s fonctionnelles des vaisseaux [54]. Ces essais cliniques sont 18] car ils r e n c o n t r e n t des h o m b r e 61ev6 de p a r a m b t r e s i n t e r v e n a n t s (th6rapeutique, etc.).

encore r a r e s dans la litt6rature [21, 58, difficult6s i m p o r t a n t e s c o m p t e t e n u du ~t 6tudier, de la complexit6 des f a c t e u r s i m m u n i s a t i o n , infection, spl6nom6galie,

INFLUENCE DU PRI~L~VEMENT: D4finition d'une p l a q u e t t e ~t usage transfusionnel. La fragilit4 p l a q u e t t a i r e est telle que t o u t e p r 6 p a r a t i o n de concentr6 est source d'alt6ration. I1 i m p o r t e d'en tenir cornpte et de t e s t e r ces p r o d u i t s a v a n t cong61ation (Tabl.-tI). L ' a n t i c o a g u l a n t CPD entraine une agr6gation spontan4e, d'ailleurs r6versible aprbs agita-

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELAT10N

85

t i o n d o u c e . I1 p e r s i s t e c e p e n d a n t t o u j o u r s q u e l q u e s ag r 6 g at s. L ' a n t i c o a g u l a n t ACD a c i d i f i 6 r 6 d u i t la p r o d u c t i o n d ' a g r d g a t s m a i s i n h i b e l ' a g r 6 g a t i o n p l a q u e t t a i r e ; c e t t e i n h i b i t i o n e s t r 6 v e r s i b l e in vivo. Le p a s s a g e /t 4oC a c t i v e les p l a q u e t t e s , f a c i l i t e l ' a p p a r i t i o n d ' a g r d g a t s . I n v i v o , les p l a q u e t t e s s o n t p l u s r a p i d e m e n t a c t i v e s m a i s o n t u n e d u r d e d e v i e r 6 d u i t e [72, 1]. Le p r o t o c o l e de s 6 p a r a t i o n j o u e u n r61e i m p o r t a n t et d o l t t o u j o u r s ~ t r e contr616 c a r les r d s u l t a t s a p r b s congdl a t i o n s o n t d ' a u t a n t m o i n s b o n s q u e la p r 6 p a r a t i o n de d d p a r t est p l u s a l t d r d e 'Tabl. H I ) . TABLEAUIII Mauvais resultaCs obtetms apr~s congdlation d'un concentrd plaquettaire ayant subi des altdrations lors de sa prdparation. I

PLAOUETTESHAEMONETICS ACD REACIDIFI~ES

POCHE GAMBRO

Num. × 10a/mm a

Avant congdlation 1 600

Morphologie (%) - - disques . . . . . . . . . . . . . . . - - spheres . . . . . . . . . . . . . . . - - ballons . . . . . . . . . . . . . . . - - dendrites . . . . . . . . . . . . . - - capping . . . . . . . . . . . . . . - - vides . . . . . . . . . . . . . . . . . Agrdgats . . . . . . . . . . . . . . . .

0 70 30 +++ 0 quelques ++

Adhdsion en 15 mn . . . . . M6pacrine . . . . . . . . . . . . . . . Agrdgation . . . . . . . . . . . . . . MDA test . . . . . . . . . . . . . . . Rdsistance osmotique .. FDA test

Les

m6thodes

3 22 25 +++ 40 10 ++

50 % 3,12 N6gative

25 % 2,23 Ndgative

C/A = 34 % R/A = 85 % 85 %

C/A = 5 % R/A = 5 % 15 %

1,03

...............

diff6rentes

Apr~s congdlation 740

de

cong61ation.

E l l e s s o n t d o m i n d e s p a r le p r o b l ~ m e d u c h o i x d u c r y o p r o t e c t e u r ( D M S O et g l y c d r o l d t a n t les p l u s usitds) et de la t e m p d r a t u r e de congdlation. Le D M S O es t u t i l i s 6 g d n 6 r a l e m e n t h des c o n c e n t r a t i o n s de 4 /t 6 % en r~alisant une dilution dans du p l a s m a autologue (TabL IV). Le m 6 1 an g e a v e c les p l a q u e t t e s d o l t ~ t r e l e n t p o u r ~ v i t e r des l d si o n s c e l l u l a i r e s p a r h y p e r t o n i e . Le D M S O a y a n t u n e g r a n d e d i f f u s i b i l i t d , il e s t p o s s i b l e de l ' u t i l i s e r p o u r des c o n g 6 1 a t i o n s l e n t e s h t e m p e r a t u r e m o d d r d e . Ceci r e n d p o s s i b l e l ' u t i l i s a t i o n de c o n g 4 1 a t e u r s ~ l e c t r i q u e s

POTRON G. et H E R V E P.

86 TABLEAUIV

Principaux protocoles pour congdlation plaquettaire en DMSO.

CONCENTRATION

AUTRE CRYOPROTECTEUR

T ,RMP~RATURE DE STOCKAGE

VITESSE DE CONG~LATION

5%

Glycdrol 5 %

--196oC --150oC

5%

AUTEURS

LAVAGES

1° C/mn

DJ~RASSI (1966)

0

l°C/mn

HANDIN

Plasma

(1972) --196oC

10 %

1-5° C/mn

SCHLICHTER

0

(1972) 5%

--196"C

1-10° C/mn

ODINK

(1973) 5%

Plasma

- - 70° C

4-6° C/mn

SEIFERT

Plasma

(1973) 5%

__

6'%

__

80oC

1°C/mn

KIM

Plasma

(1974) 80oC

2-3°C/mn

VAL~RI

Plasma

(1974) 5%

Plasma

__

80oC

1° C/mn

SCHIFFER

~asma

(1976)

et de r 6 c i p i e n t s e n PVC a u l i e u de p o l y o l d f i n e o u e n t e f l o n - k a p t o n . C e p e n d a n t , cette facilit6 t e c h n i q u e et c e t t e 6 c o n o m i e s o n t c o m p e n s 6 e s p a r le r i s q u e de t o x i c i t 6 d u DMSO p o u r le m a l a d e ( n a u s d e , v o m i s s e m e n t s , v e i n o s p a s m e ) [64]. Ceci e x p l i q u e p o u r q u o i a p r 6 s d6congdlat i o n apr6s i m m e r s i o n d a n s u n b a i n - m a r i e /t 37°-40°C, les a u t e u r s p r a t i q u e n t g d n d r a l e m e n t u n lavage. Ce l a v a g e est fait le p l u s s o u v e n t e n p l a s m a avec des c o n c e n t r a t i o n s d ' o s m o l a r i t 6 d d c r o i s s a n t e . I1 s'agit d ' u n e c o n t r a i n t e coflteuse, q u i r e t a r d e la d i s t r i b u t i o n d u p r o d u i t et s u r t o u t q u i a c c r o i t les 16sions p l a q u e t t a i r e s . Le glyc6rol a 6t6, a u d 6 p a r t , c o n s i d 6 r 6 c o m m e u n m a u v a i s cryop r o t e c t e u r p l a q u e t t a i r e . Ceci t i e n t s a n s d o u t e a u fait q u e les v i t e s s e s de c o n g d l a t i o n 6 t a i e n t t r o p faibles. I1 s e m b l e q u e les c o n c e n t r a t i o n s o p t i m a l e s s o i e n t de 3 /t 5 % p o u r u n a b a i s s e m e n t de t e r n p d r a t u r e tr~s i m p o r t a n t ( - - 3 0 ° C / m i n u t e ) o u de 14 % p o u r des a b a i s s e m e n t s p l u s faibles ( T a b l . V ) [68]. L ' a p p o r t de g l u c o s e [14] p r o p o s 6 p a r c e r t a i n s est c o n t e s t 6 p a r d ' a u t r e s [28]. D a n s t o u s les cas, ce c r y o p r o t e c t e u r , s o u v e n t prdfdrd p o u r sa f a i b l e toxicitd, n d c e s s i t e u n contr61e

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

87

a s s e z p r 6 c i s d e l a v i t e s s e d ' a b a i s s e m e n t d e la t e m p d r a t u r e . I1 p e r m e t t o u t e f o i s d ' d v i t e r l e l a v a g e a p r b s d 6 c o n g 6 1 a t i o n r a p i d e /: 37°C. De nombreux autres cryoprotecteurs o n t 6t6 u t i l i s d s a v e c d e s r 6 s u l t a t s a s s e z m a u v a i s [30, 7, 57, 65] ( T a bI V I ) s a u f p o u r le d i m S TABLEAU V

Principaux protocoles pour cong~lation plaquettaire en glycdrol. CONCENTRATION

AUTRE CRYOPROTECTEUR

9%

TEMPl~RATURE DE STOCKAGE _

VITESSE DE CONGI~LATION

AUTEURS

1° C / m n

75oC

BALDINI

(1960) 10-12 '%

--

1° C / m n

80oC

COHEN

(1966) 5%

Dextrose 4 %

- - 196oC

30° C / m n

DAYIAN-RowE I

14 %

__

2-3° C / m n

80oC

(1971) SUMIDA

(1974) 5%

Dextrose 4 %

--

30" C / m n

196oC

SUMIDA

(1975) 3% 3%

Dextrose 3 %

--

196 ° C

35° C / m n

HERV~ (1977)

--

196oC

35° C / m n

HERV~

(1977)

• TABLEAUVI Quelques cryoprotecteurs utilisds

dans la congdlation plaquettaire.

CRYOPROTECTEUR

AUTEUR

Hydroxy-6thyl-starch

SPENCER (1969) RAYMOND (1975) TAYLOR ( 1971)

Dim6thyl ac6tamide

DJgRASSI VEZON

Polydthyl~ne glycol

KAHN (1973) RAYMOND (1975)

Dextran

RAYMO~¢D (1975) TAYLOR (1981)

Polyvinyl pyrrolidone

WYBRAN

( 1971 ) (1980)

(1972)

88

POTRON

G. et H E R V E

P.

thylac6tamide [77, 70]. Cependant, la dur6e de la conservation d6pend de la t e m p 6 r a t u r e de stockage. En o c t o b r e 1978 l'American National Red Cross r e c o m m a n d e : six mois ~ - - 8 0 ° C , deux ans h - - 1 2 0 ° C et ind6fini h - - 1 9 6 ° C .

Choix d'un cryoprotecteur. Le DMSO est g6n6ralement pr6f6r6 p o u r sa grande diffusibilit6 p e r m e t t a n t de r e c o u r i r h des protocoles vari6s : abaissement lent et non contr616 de la t e m p 6 r a t u r e , conservation h t e m p 6 r a t u r e mod6r6merit basse avec des r6sultats satisfaisants (TabI. IV). Malheureusement, c'est un p r o d u i t n o n d6pourvu de toxicit6 et d ' o d e u r d6sagr6able p o u r le receveur. I1 est donc n6cessaire de laver les plaquettes apr~s d6cong61ation, ce qui aboutit ~ u n t r a u m a t i s m e suppl6mentaire. Le glyc6rol diffuse lentement, s u r t o u t en pr6sence de glucose. I1 semble donc n6cessaire d'utiliser des protocoles plus r i g o u r e u x : abaissement rapide de temp6rature, c o n s e r v a t i o n en azote liquide. I1 i m p o r t e aussi de choisir avec pr6cision le t e m p s d ' i n c u b a t i o n avec le glyc6rol avant cong61ation. Les r6sultats sont alors c o m p a r a b l e s ceux obtenus avec le DMSO (Tabl. V). Cependant, la t r a n s f u s i o n est i m m ~ d i a t e m e n t possible apr~s d6cong61ation, ce qui 6vite le traum a t i s m e et la perte de t e m p s du lavage. Tout c r y o p r o t e c t e u r est source d ' h y p e r o s m o l a r i t 6 responsable de ldsion plaquettaire. I1 i m p o r t e doric de bien connaitre sa vitesse de diffusion, ses variations en fonction de la t e m p 6 r a t u r e p o u r utiliser ces produits ~ leur o p t i m u m d'activit6. Si une conservation en congdlateur 61ectrique est ais6e et 6conomique, il i m p o r t e de r e m a r q u e r que le point eutectique du DMSO est - - 6 0 ° C . Tout remontde p r o c h e de cette t e m p 6 r a t u r e fair donc courir le risque d'une recristallisation avec alt6ration cellulaire. L ' a u g m e n t a t i o n du gradient o s m o t i q u e provoqude par la pdn6tration plus ou moins rapide d ' u n c r y o p r o t e c t e u r peut engendrer des d6g~ts cellulaires dont il est f o n d a m e n t a l d'6valuer le risque avant de p r o g r a m m e r la descente en temp6rature. C'est par la rdsistance osmotique, test tr6s sensible aux facteurs osmotiques et lid h une b o n n e viabilit6 cellulaire, q u ' o n a abord6 l'6tude des c r y o p r o t e c t e u r s . C'est ce test qui nous a permis, dans u n p r e m i e r temps de mani6re fortuite, et s e c o n d a i r e m e n t de fa~on plus syst6matis6e, l ' a p p r o c h e de la cin6tique de p6ndtration intracellulaire des deux c r y o p r o t e c t e u r s utilis6s (DMSO, glyc6rol), les ph6nom6nes o s m o t i q u e s engendr6s 6tant fonction de l'agent, de la t e m p 6 r a t u r e et du temps d'incubation. Par ce test, on r e m a r q u e que le DMSO p6n6tre dans les cellules r a p i d e m e n t et ce, quelle que soit la c o n c e n t r a t i o n utilisde (5, 10 %) et

89

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

quelle que soit la t e m p 6 r a t u r e d ' i n c u b a t i o n (Fig. 3). Par contre, le glyc6rol (volume final 3 %) p6n6tre lentement et 6galement en fonction de la t e m p d r a t u r e d'incubation. Le r e t o u r /t la densit6 optique initiale est n e t t e m e n t plus lent que le DMSO et plus g r a n d ~ 37°C qu'h 22°C voire m4me h + 4°C. Associ6 au glyc6rol le glucose rdduit ces varia-

~'DO 02 ~ "PRP

nMcn go."

22°C

' " .....

!

g

DNSO

i:i

~'i

TEMPS eiN,~

Fro. 3.

tions et nous avons vdrifi6 que ceci 6tait dfi / t u n e r6duction de la p6ndtration du glyc4rol intraplaquettaire, c'est p o u r q u o i nous avons a b a n d o n n d le glucose proposd j u s q u ' a l o r s en association avec le glyc6rol. Nous avons voulu savoir si ces variations de densit6 optique etaient li4es ~ la simple r6fringence de la plaquette ou 6taient en relation avec l ' a u g m e n t a t i o n du volume plaquettaire, t4moin de la pdn6tration intracellulaire des cryoprotecteurs. C'est grgtce /~ l'4tude m i c r o s c o p i q u e (contraste de phase, type Nomarsky, h transmission 61ectronique et g balayage) que nous avons abord4 l'6tude morphologique. Apr6s quelques minutes g 37°C, en prdsence de glyc6rol ( c o n c e n t r a t i o n finale 3 %), la plaquette passe par un stade de ballonisation typique. Une incubation plus prolongde h cette t e m p d r a t u r e conduit h une d6shydratation de la cellule qui se traduit en N o m a r s k y par une image en faucille (cellule incurvde, de petite taille, inf6rieure la plaquette lenticulaire). Cet aspect est confirm6 en microscopie

90

P O T R O N G. et H E R V E P.

61ectronique. Ces p h 6 n o m ~ n e s se r e t r o u v e n t h 22°C et s u r t o u t h 4°C, p o u r des d61ais d ' i n c u b a t i o n p l u s longs. TABI~AVVII Actions c o m p a r d e s du glycdrol et du DMSO.

DMSO

GLYCI~ROL

Si~ge

intracellulaire

intracellulaire

Diffusibilit6 37oC 22oC 4oC

+++ +++ +++

++ +

Toxicit6 cellulaire

++

+

Effets secondaires

Odeur Ldger malaise

Permdabilit6 cellulaire

Changements isom~riques acides gras

M6canisme actif

Cryoprotection

- - macromol6cule membrane cellulaire changement conformationnel enzymes

- - environnement aqueux

- - 60° C

- - 2° C

-

Point eutectique Propri6tds physico-chimiques

-

] - - solvant acides gras I - - non dlectrolyte - - hygroscopique

- - solvant sels - - solubles H20

La cong61ation f a i s a n t a p p a r a i t r e u n e d d s h y d r a t a t i o n de la cellule, il p a r a i t p e u l o g i q u e d ' a t t e n d r e celle p r o v o q u d e p a r le c r y o p r o t e c t e u r m a i s p l u t 6 t de c o n g e l e r la p l a q u e t t e ~ s o n s t a d e d ' h y p e r h y d r a t a t i o n dfi, d a n s u n p r e m i e r t e m p s , a u c r y o p r o t e c t e u r . Des essais c o m p a r a t i f s de cong61ation d ' u n m a m e c o n c e n t r 6 p l a q u e t t a i r e /~ d i f f 6 r e n t s t e m p s a p r 6 s a p p o r t de glyc6rol o u de DMSO o n t c o n f i r m 6 c e t t e notion theorique. S u r u n p l a n p r a t i q u e , de tels t r a v a u x c o n f i r m e n t q u e l ' i n c u b a t i o n avec le DMSO d o i t ~tre c o u r t e et ~ b a s s e t e m p d r a t u r e . P a r c o n t r e , avec le glyc6rol, la raise e n c o n t a c t d o i t d u r e r u n t e m p s d ' a u t a n t p l u s l o n g q u e la t e m p d r a t u r e s e r a p l u s b a s s e ; c e p e n d a n t , u n d61ai t r o p long sera ndfaste.

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

91

Probl~mes techniques particuliers. A. - - INFLUENCE DU CONTAINERFLASTIQUE. Les sacs de chlorure de polyvinyl (PVC) ont 6t6 accus6s de toxicit6 p a r relargage de plastifiant (di-2-dthyl-hexyl-pthalate) [33]. Cet effet n ' a pas 6t6 retrouv6 p a r d'autres c o m p a r a t i v e m e n t aux poches en polyol6fine [75]. Si les containers en PVC sont inutilisables en azote liquide, la r6sistance des poches teflon-kapton est trbs bonne. Nous avons v6rifi6 qu'elles n'entra~nent pas d'activation m a r q u 6 e des plaquettes. B. - - IMPORTANCEDU MODE DE LAVAGE. I1 doit 6tre aussi peu t r a u m a t i s a n t que possible. Effectu6 ~ 22°C, il doit 6viter les centrifugations importantes. Le milieu de lavage le mieux adapt6 nous semble ~tre le p l a s m a frais autologue (Tabl. V I H ) . Le p l a s m a frais isologue est souvent plus ais6 h obtenir mais s'av6re souvent ,, toxique ,> p o u r les plaquettes. I1 est donc souhaitable de congeler h - - 8 0 o C le p l a s m a du d o n n e u r de sang pr6par6 lots de la s6paration plaquettaire. C. - - INFLUENCEDE LA DELEUCOCYTATIONDES CONCENTRI~SPLAQUETTAIRES. H o r m i s le b u t 6vident d'6viter les accidents d ' i m m u n i s a t i o n , il am61iore les rdsultats. Ceci semble dfi / t u n e m o i n d r e lib6ration d'enzymes leucocytaires (polynucl6aires et monocytes) d6truits lors de la cong61ation [28]. D. - - INFLUENCE DE LA CONCENTRATIONPLAOUETTAIRE. Elle ne doit pas d6passer 10.166/mm 3. Une c o n c e n t r a t i o n plus 61ev6e ~vite de congeler de grands volumes mais entra~ne des alt6rations irnportantes (Tabl. X ) .

R~sultats cliniques. La m a j o r i t 6 des r6sultats a 6t6 publi6e h p a r t i r de concentr6s plaqnettaires congel6s en DMSO. La survie plaquettaire parait 6gale /t des plaquettes fra~ches mais le r e n d e m e n t est moins bon [37, 22, 73, 29, 48, 63, 60, 4, 71, 66]. On obtient c e p e n d a n t une nette augmentation du d6compte plaquettaire chez les receveurs thrombop6niques [16, 34, 59, 11]. Le t e m p s de saignement se r a c c o u r c i t chez ces m~mes sujets t h r o m b o p 6 n i q u e s [30, 60, 80]. Les plaquettes ainsi conserv6es sont capables d'arr~ter les h6morragies chez les sujels t h r o m b o p 6 n i q u e s [60, 80].

92

POTRON

otn

P.

,~-o0

o~

+ +

2

G. et H E R V E

2

II II

8

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CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

93

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94

POTRON (7. et H E R V E P. TABLEAU X Influence de la concentration plaquettaire sur la congdlation en glyc&ol 3 % d --196°C. PLAQUETTES CONGELI~ESGLYCEROL 3 % ORIGINE

PARIS Num. × 10a/mm 3 Morphologie (%) -disques . . . . . . . . . . . . . - - spheres . . . . . . . . . . . . . - - ballons ............. - - dendrites . . . . . . . . . . . - - capping . . . . . . . . . . . . . -- rides ............... Agrdgats . . . . . . . . . . . . . . . . . Adh6sion en 15 m n Mdpacrine

FDA test

.............

1 600

5 80

0 40 40 ++ 10 10 +++

5 15 20 55 5

30 %

10 %

5%

2,79

2,69

3,05

N6gative pH acide

Ndgative

N6gative

--

--

3,15

C/A = 17 % R/A = 47 %

C/A = 15 % R/A = 32 %

C/A = 5 % R/A = 14 %

MDA test . . . . . . . . . . . . . . . Rdsistance osrnotique

1200

0

...............

Agr6gation . . . . . . . . . . . . . . .

REIMS

600

++ 10 5

....

PARIS

................

50 %

Apr6s conservation avec le glycdrol, des essais r6duits mais favorables sont rapport6s [13, 14, 69, 3, 8]. A u c o u r s d ' u n e s 6 r i e d e 50 transfusions c h e z 19 p a t i e n t s , 54 % d ' a r r 6 t h 6 m o r r a g i q u e total et 33 % p a r t i e l o n t 6 t 6 o b t e n u s [ 7 6 ] . En utilisant une mdthode de cong61ation en glucose ~ 3 % [26], F u n d e n o u s a t r a i t 6 170 p a t i e n t s a v e c 230 c o n c e n t r 6 s . I1 a 6 t 6 t r a n s f u s 6 142 u n i t 6 s d ' u n d o n n e u r e t 88 p o o l s a p a r t i r d e 12 d o n n e u r s ( T a b l . X I ) . Int6r6ts

et

organisation

d'une

banque

de plaquettes

congel6es.

L e p r i x 61ev6 d e l a c o n s e r v a t i o n des plaquettes par cong61ation n'est pas le seul facteur limitant l'utilisation de cette technique. En effet, aucune technique n'assure un rendement ~ 100 % e t l e s plaquettes dites fraiches demeurent actuellement les plus efficaces. La conservation

h long terme

peut 6tre envisag6e h deux niveaux :

CONSERVATION DES PLAQUETTES PAR CONGELATION

95

TABLEAU X I

Efficacitd clinique des transfusions plaquettaires congeldes & - - 1 9 6 ° C en glycdrol 3 %. MALADES. -- l e u c 6 m i e s aigu~s n o n l y m p h o b l a s t i q u e s - - leuc&~lies a i g u ~ s l y m p h o b l a s t i q u e s -- insuffisance m6dullaire -- ]ymphosarcome -- tumeurs solides -autres.

97 23 23 11 9 7

INDICATIONS - - t h r o m b o p d n i e s 20-109/1 -- hdmorragies cutan6o-muqueuses -- hdmorragies visc6rales - - h 6 m o r r a g i e s d u f o n d d',eeil -- prophylaxie.

63 % 14 % 11% 1 2 '%

QUANTITI~ --

3,9

. 1011

(2,7

h

5,2

.

1011 )

RENDEMENT IN VITRO ( a u g m e n t a t i o n p l a q u e t t e s × VST) x

100

( p l a q u e t t e s t r a n s f u s d e s × 1011) -- curatif : 18 % ( 0 h 30,5) - - p r 6 v e n t i f : 28 % (11 ~t 50,5). EFFICACITI~. --si l'on tient compte

1 de l'efficacit6 imm6diate:

bonne

dans

- - s i82 l% ' o nd etsi e ncas. t c o m p t e g l a fois d e l ' e f f i c a c i t d e t de l a n o n r d c i d i v e d a n s les 48 h e u r e s : b o n n e d a n s 67 % de s cas. I I

1) L E TRAITEMENT EN URGENCE.

La p r d p a r a t i o n quotidiellne de concentrds unitaires conservds en agitation continue n6cessite des efforts et doric des ddpenses importantes p o u r p r d p a r e r un p r o d u i t parfois n o n utilis6 ou parfois quantit a t i v e m e n t insuffisant. Ce problbme ne se pose plus avec la cong61ation et 6vitant les pertes ou les insuffisances peut se t r o u v e r financibrement rentable. L'unit6 t h 6 r a p e u t i q u e o b t e n u e h p a r t i r de 12 concentrds unitaires devrait 6tre rdserv6e au t r a i t e m e n t u r g e n t de malade n o n prdimmunisd et p o u r une pathologie transitoire (coagulopathie de c o n s o m m a t i o n p a r exemple). 2)

LE TRAITEMENT DES PROBL~MES IMMUNOLOGIQUES.

L'unit6 th6rapeutique obtenue h p a r t i r d ' u n seul d o n n e u r doit t e n d r e 5 r6soudre le p r o b l b m e des sujets immunisds ou immunisables

POTRON G. et HERVE P.

96

( c a r a t t e i n t s d ' u n e a f f e c t i o n d u r a b l e n 6 c e s s a i r e des t r a i t e m e n t s it6ratifs). La cong61ation p e r m e t p l u s f a c i l e m e n t de r e s p e c t e r les c o m p a t i b i l i t 6 s . Elle p e u t d e v e n i r u n e a i d e c o n s i d 6 r a b l e m ~ m e si l ' o n d i s p o s e d ' u n m o y e n i n f o r m a t i s 6 de s61ection des d o n n e u r s . Au m i n i m u m , les p l a q u e t t e s congel~es d e v r a i e n t 6 t r e g r o u p i e s avec l ' a n t i g 6 n e HL-A 2. Bien ~videmment, c'est la seule solution p e r m e t t a n t l'auto-transf u s i o n l o r s d ' a f f e c t i o n e n t r a i n a n t des t h r o m b o p 6 n i e s p a r cycle, n o t a m m e n t chez les s u j e t s p r 6 - i m m u n i s 6 s . Elle est le c o m p l 6 m e n t l o g i q u e des a u t o - t r a n s p l a n t a t i o n s de m o e l l e o s s e u s e . Pr G. POTRON, C.H.U. de Reims, rue Alexis-Carrel, 51100 REIMS.

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